تبلیغات
مروری برحشره شناسی پزشکی - تهیه نمونه برای میکروسکوپ الکترونی(EM)

امروز:

تهیه نمونه برای میکروسکوپ الکترونی(EM)

تهیه نمونه برای میکروسکوپ الکترونی(EM):

1- فیکس کردن درگلوترآلدهید (سمی و باید ازدستکش استفاده شود) و اسمیوم تترا اکسید (سمی وباید ازدستکش استفاده شودوباعث مرگ سلول ها می شود).

2- خواباندن در رزین وتهیه برش نازک

3- رنگ آمیزی با سیترات سرب و استات اورانیل (زیر هود کارشود، موقع رنگ آمیزی نباید نفس کشید چون CO2 خارجی از تنفس باعث واکنش با آنها می شود.)

4- سایه زنی Shadowing با فلزات سنگین

5-Freeze-fracture  

6- Whole-mount

 

برش نازک با آلترامیکروتوم:

1- ازچاقوی شیشه ای یا الماسی استفاده می شود.

2-Embed  : خواباندن دریک رزین سخت

3- برش های با ضخامت چند انگستروم

4-  برش های ذوزنقه شکل روی سطح برکه آب

5- جمع آوری برش های نقره ای یا طلایی باتوری سیمی

6- توری مسی با غشاءکربنی یا پلاستیکی

7- رنگ آمیزی با املاح تنگستن، اورانیوم، اوسمیوم یا منگنز

 

معایب تهیه برش نازک:

1- طاقت فرسا بودن تهیه نمونه

2- امکان ضایعات (Artifacts) ثبوت، استقرار یا رنگ آمیزی

3- دشواری ترسیم نمای سه بعدی جسم

4- شکنندگی نمونه نازک

5- بروز نمونه به تشعشع الکترونی وآسیب به نتقطه مربوط

 

رنگ آمیزی منفی: 1- برای ویروس ها وموادبسیار ریز2- خواباندن دریک مایع غلیظ مانند اسید فسفو تنگستیک

سایه زنی بافلزات سنگین:

1- تابش مورب و رسوب فلز سنگین بطور مایل2- سایه زنی دوار برای DNA

* معایب سایه زنی با فلزات سنگین: امکان اختفاء اجزاء ریز

 

Freeze-fracture :

1- یخ زدگی نمونه در100درجه سانتیگراد

 2- برش درخلاء درهمان دما

3- گسستگی بافت درطول خطوط ضعف طبیعی

 4- رها سازی جهت تبخیرآب

5- سایه زنی با فلزات سنگین

 6- شستشوی نمونه با اسید ومشاهده رپلیکای فلزی

 

Whole-mount:

1- برای کرومزومها و اجسام ضخیم

2- نه برش، نه رنگ آمیزی

 3- نواحی ضخیم پخش قویتری از الکترونها نسبت به باریک دارند

4- تصویرحاصل ازتباین بازتابش الکترون ها

 5- امکان اندازه گیری توده نمونه

 6- رنگ آمیزی شیمی سلولی (یعنی تبدیل یک آنزیم محلول مثل G6Pase به ماده نامحلول با غلظت الکترونی زیاد)

 

میکروسکوپ الکترونی نگاره (اسکنینگ) یا SEM :

1- نوسان متنوع شعاع باریکی از الکترونها روی نمونه

2- بازتابش و پخش الکترونها هنگام برخورد با نمونه

3- جمع آوری الکترونها با لوله     Photomultiplier   

4- فرورفتگی ها الکترون کمتر دریافت می کنند، برآمدگی ها الکترون بیشتر دریافت می کنند.

5- قدرت تمایز بیشتر ازنوری اماکمتراز میکروسکوپ گذاره

معایب میکروسکوپ نگاره

1- قطر اشعه (که خیلی نازک است)

2- نحوه تهیه نمونه

3- اسباب تجمیع و نمایش تصویر

 4- قدرت تمایز= 5 انگستروم

نحوه تهیه نمونه برای نگاره:

1- ثبات درگلوترآلدهید

 2- یخ زدگی وخوشکاندن در فرئون ونیتروژن مایع

 3- سایه زنی با لایه ضخیم طلا در دستگاه Sputter coater

 4- طلا سطح هادی الکترون ها

مزایا ومعایب میکروسکوپ الکترونی ونوری:

1-  TEM>SEM>LM  

2-  نوری برای اجسام زنده حاوی آب بسیار مناسب است.

3-  الکترونی برای اجسام خشک در خلاء

4-  نوری: درک رنگ ها، اما الکترونی: منوکروماتیک

5-  نگاره: نمای عمیق 300 برابر اجسام، اما نوری: روئیت سطوح

6-  گذاره: رپیلکای فلزی برای سطوح

7-  نوری: تهیه نمونه سریع ولی در الکترونی کند است، اما در الکترونی اجزا نانومتر را می بینیم.


نوشته شده در : دوشنبه 26 اردیبهشت 1390  توسط : محسن محبی نودژ.    نظرات() .

How long does it take to recover from Achilles injury?
پنجشنبه 16 شهریور 1396 02:58 ق.ظ
Fantastic beat ! I would like to apprentice while you amend your website, how can i subscribe for a blog website?
The account aided me a acceptable deal. I had been tiny bit acquainted of this your broadcast offered bright clear concept
How can we increase our height?
شنبه 14 مرداد 1396 07:45 ق.ظ
What's Happening i'm new to this, I stumbled upon this I've discovered
It absolutely useful and it has helped me out loads. I am hoping to give a contribution & aid different customers
like its aided me. Great job.
http://russell8meadows7.jigsy.com
چهارشنبه 7 تیر 1396 09:25 ق.ظ
I'm curious to find out what blog platform you have been using?

I'm having some minor security issues with my latest website and I'd like
to find something more secure. Do you have any suggestions?
manicure
سه شنبه 22 فروردین 1396 03:31 ق.ظ
I will immediately grasp your rss as I can't in finding your email
subscription hyperlink or newsletter service. Do you have
any? Kindly permit me recognize in order that I may subscribe.
Thanks.
BHW
دوشنبه 21 فروردین 1396 02:17 ب.ظ
Howdy I am so happy I found your web site, I really found you by error, while I
was browsing on Askjeeve for something else, Nonetheless I am here now and would just like to say thank you for a incredible post and a
all round thrilling blog (I also love the theme/design),
I don’t have time to browse it all at the minute but I have
saved it and also added in your RSS feeds, so when I have time I will be back to read a lot more, Please do keep up the excellent
work.
جمعه 5 مهر 1392 05:04 ب.ظ
كمك كرد متشكرم
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر